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关于光泽精化学发光法大发注册

  NBT法的原理是生成不溶于水的蓝色甲臢染料(lmax: 560 nm)去和O2-反应。大发注册如果用分光光度计作为一种简单的实验设备的话,就需要一种与cytochrome C和NBT相似的比色探针。分光光度法是最为典型的检测SOD的方法,这种方法使用了细胞色素 C(cytochrome C)或者氮蓝四唑(NBT)(图1)。也可直接点“搜索资料”搜索整个问题。最常见的诱捕剂是5,5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide(DMPO)。这种染料不溶于水,在做长时程分析时会生成不均一的沉淀物,大发注册大发注册从而影响实验数据的重现性。

  为了克服上述的诸多问题,我们在做SOD检测时需要考虑如下几个方面:实验设备要简单、经济,pH灵敏度要低,对O2-有高度的特异性。由于O2- 诱捕DMPO会产生一个特殊的光谱图,因此ESR法是O2-检测的方法中特异性最好的一种。而且,这种方法需要每隔1.5分钟就要察看一下,因此不适合做大批量的实验。例如,光泽精只有在pH 9.0或者更高处会发出强烈的化学光。另一方面,MCLA在生理条件下能够发出较强的化学荧光,因此可以用于人脑的Cu,Zn-SOD活性的检测。用cytochrome C的还原法来检测O2-是因为还原后的cytochrome C会生成紫色的染料(图解 2)。为了得到水溶性的甲臢染料,许多改良后的方法如添加BSA被人们所采用。可选中1个或多个下面的关键词,搜索相关资料。但是,MCLA不适合用作SOD检测的探针,因为它不单单和O2-反应,还会和单质氧反应。而且MCLA与溶解氧反应后会发出化学光,转移的金属离子还会加速氧化反应。这是自SOD被发现以来最常用的方法。因为cytochrome C很容易被NADPH还原酶或者其他的还原剂所还原,因此必须要考虑样品的污染因素。大发注册但是,添加了不必要的蛋白质会使数据分析变得十分复杂,大发注册而且NBT会被多种还原剂所还原。检测中最重要的一点是在没有其他物质干扰的情况下,测定出SOD100%的抑制率。

  NBT的这种特性被用于酮胺的检测,酮胺可以作为糖尿病的标记物并且是Maillard反应的中间体。这种化学发光反应对pH有高度的依赖性。然而,DMPO与O2-间的二阶速度常数比O2-自发反应常数相对要低,因此需要向溶液中加入大量的DMPO(如:终浓度为0.45M)。为了得到一种新的检测SOD的方法,我们对还原后能生成水溶性甲臢的四唑盐作了一系列的实验在室温下,溶液中O2-的ESR信号不能直接被检测出,大发注册但能够通过自旋捕捉法间接获得。这样,每次试验所要用的DMPO将花去大笔的经费。因此,在生理的pH条件下用这种方法检测SOD是不可行的。用于O2-检测的化学发光探针同样也能用于SOD的检测,这种探针分为2种,一种是光泽精,另一种是荧光素衍生物(MCLA)。NBT法的最大缺点是即使加入过量的SOD也不能获得100%的抑制率,原因是NBT会与黄嘌呤氧化酶直接反应。

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